Por M.V.Z Mauricio Castillo G.
Depto. Técnico Reproducción Animal
Desde antes de la década de los 80 se realizaron diversos intentos para encontrar una técnica que permitiera preseleccionar con seguridad el sexo de la progenie de diversos animales. Sin embargo, no fue hasta los años 90 cuando el Dr. Lawrence Johnson, que había comenzado a trabajar en este proyecto en 1982, desarrolló un método exitoso utilizando la Citometría de Flujo. Este método fue patentado por el Departamento de Agricultura de los EE.UU. en el año 1992.La Citometría de Flujo se utiliza desde finales del decenio de 1970 para el análisis y la clasificación de una variedad de tipos de células en suspensión de líquidos. Estas células pueden ser distinguidas y seleccionadas sobre la base del tamaño y la forma, así como por la presencia de diferentes moléculas dentro y en la superficie de las mismas.
En el caso de la preselección de sexo, ésta se basa en la identificación de las diferencias que existen entre los cromosomas X e Y del esperma. El contenido de ADN es la única diferencia real conocida entre el espermatozoide X y el Y; en el caso de los mamíferos el espermatozoide X contiene más ADN que el espermatozoide Y, pero la diferencia varía según la especie. En el ganado bovino y en los caballos el espermatozoide X tiene un 3.8 % más ADN que el espermatozoide Y. En los cerdos el espermatozoide X contiene un 3.6 % más de ADN, en la chinchilla un 7.5 % y en el humano es tan solo un 2.8 % más. Mientras
mayor es la diferencia en contenido de ADN más fácil es la separación de los espermatozoides con un mayor grado de pureza.
Cual es el proceso de selección para el semen sexado
Los eyaculados aprobados para ser sexados (motilidad progresiva mayor o igual al 60% y concentración mayor a 1 x 109 espermatozoides/ml) son teñidos con un colorante fluorescente que tiñe las bases de ADN. Luego los espermatozoides se hacen pasar, en forma de una corriente o flujo muy delgado, a través de la máquina separadora, la cuál utiliza un rayo láser que al estimular los espermatozoides les hace brillar más o menos en función de su contenido en ADN. Los espermatozoides X contienen un poco más de ADN, atrapan más colorante y esto hace que se vean más fluorescentes. Posteriormente, mediante un software se clasifican los espermatozoides en tres grupos: 1) los que portan cromosoma X; 2) los que portan el Y, y 3) una población mixta de portadores de X y de Y (que no han podido ser clasificados con absoluta certeza).
El flujo de espermatozoides se divide o fracciona entonces en gotitas pequeñísimas, conteniendo un espermatozoide cada una de ellas, que pasan por un dispositivo que les dota de una carga eléctrica positiva o negativa según la clasificación previa y se les hace pasar luego por un campo magnético que separa las dos poblaciones. Los espermatozoides seleccionados son así desviados del flujo original y recolectados en un tubo para su posterior uso. El semen fresco deberá utilizarse en las siguientes 24 horas, aunque también es posible su congelación para utilizarlo posteriormente. Las dosis de semen sexado no contienen espermatozoides muertos o anómalos ya que estos espermatozoides no se tiñen y por lo tanto no se separan.1. Un cristal piezoeléctrico ondula y quiebra la corriente en gotículas -90,000/segundo.
2. Un rayo láser proyecta luz azul sobre los espermatozoides.
3. Los espermatozoides "X" fluorescen con 4 % más de intensidad qué los "Y".
4. La computadora procesa la fluorescencia detectada y categoriza los espermatozoides como: "X," "Y" o dudosos.
5. Se aplica una carga negativa, positiva o ninguna a las gotículas.
6. Las gotículas cargadas son desviadas cuando pasan frente a placas continuamente cargadas
7. Las muestras son recogidas en tres recipientes.
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